Thực hành. Một số thí nghiệm về enzim – Soạn Sinh 10

Thử nghiệm với enzyme catalase

Thí nghiệm sử dụng enzyme trong dứa tươi để tách chiết DNA

Làm thế nào để tiến hành?

– Đặt 1 lát khoai tây sống vào tủ lạnh hoặc khay đá 30 phút trước khi thí nghiệm, 1 lát luộc chín, 1 lát để ở nhiệt độ phòng.

– Nhỏ 1 giọt H lên mỗi lát khoai tây₂O₂

– Quan sát hiện tượng và so sánh lượng bọt khí trong mỗi lát.

– Bước 1: Nghiền mẫu vật

Bỏ màng bao bọc gan sau đó xắt gan thành từng miếng nhỏ rồi cho vào máy xay hoặc máy xay sinh tố để tách và làm vỡ các tế bào gan. Nếu xay gan bằng máy xay sinh tố thì khi xay bạn cần cho vào cối một lượng nước lạnh gấp đôi lượng gan. Nếu xay bằng cối và chày thì sau khi xay cho một lượng nước gấp đôi lượng gan và khuấy đều.

Sau đó lọc hỗn hợp này qua giấy lọc hoặc vải màn hoặc lưới lọc để loại bỏ các phần xơ bám lấy chất lỏng.

Bước 2: Tách ADN ra khỏi tế bào và nhân tế bào. Lấy một thể tích dịch lọc cho vào ống nghiệm chiếm khoảng 1/2 thể tích ống nghiệm, sau đó cho vào ô tính một lượng nước rửa bát bằng 1/6 khối lượng dịch ô. Sau đó, khuấy nhẹ và để yên trong 15 phút trên giá ống nghiệm. Chú ý tránh khuấy mạnh làm nổi bọt. Thêm vào ống nghiệm một lượng nước lá dứa bằng khoảng 1/6 hỗn hợp huyền phù tế bào chứa trong ống nghiệm và khuấy nhẹ. Chuẩn bị nước lá dứa như sau: dứa tươi gọt vỏ, cắt nhỏ rồi dùng máy xay sinh tố hoặc cối và chày giã nhuyễn, sau đó lọc lấy nước cốt bằng rây hoặc giấy lọc rồi cho vào ống nghiệm sạch.

Để ống nghiệm trên giá trong vòng 5 – 10 phút.

– Bước 3: Kết tủa DNA trong dịch tế bào bằng cồn. Nghiêng ống nghiệm và đổ etanol 70-90 ° dọc theo thành cẩn thận sao cho cồn tạo thành nổi trên bề mặt hỗn hợp với lượng bằng với lượng dịch có trong ống nghiệm.

Để ống nghiệm trên giá khoảng 10 phút và quan sát lớp cồn trong ống nghiệm. Chúng ta có thể thấy các phân tử DNA kết tủa lơ lửng trong lớp cồn dưới dạng những sợi màu trắng sữa.

Bước 4: Tách DNA khỏi lớp cồn

Dùng que tre cho vào lớp cồn, khuấy nhẹ để các phân tử ADN bám vào que tre rồi lấy ra quan sát. Vì các sợi DNA kết tủa rất mỏng manh nên việc lấy DNA ra khỏi ống nghiệm phải rất nhẹ nhàng.

Hiện tượng

– Khoai tây thái lát: sủi bọt trắng

– Khoai tây chín: không bọt

– Khoai tây ngâm lạnh: sủi bọt trắng

Có kết tủa trắng và nổi lên trên lớp rượu

Giải thích

– Khoai tây thái lát: sủi bọt trắng → Chứa nhiều men catalaza.

– Lát khoai chín: không có bọt → không có men catalaza vì bị nhiệt độ cao phá hủy.

– Lát khoai ngâm lạnh: sủi bọt, ít bọt trắng → hoạt tính của catalaza giảm trong điều kiện nhiệt độ thấp

Kết tủa và nổi lên dưới dạng DNA

Trả lời các câu hỏi

– Cho nước rửa chén vào sử dụng hóa chất trong chất tẩy rửa có chất hoạt động bề mặt mạnh, sẽ giúp phá vỡ màng tế bào và màng nhân.

Sử dụng enzyme trong dứa để phá hủy và biến tính protein.